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目的了解:天津地区所见淋球菌对抗生素的耐性及产青霉素酶淋球菌(PPNG)和高水平耐四环素淋球菌(TRNG)的流行状况。方法用琼脂稀释法测定低抑菌浓度(MIC)以及用纸片碘量法检测p内酰胺酶 。结果167株淋球菌检出PPNG 9株(5.40h)、TRNG 16株(9. 60)、左旋氧氟沙星耐率达78.4%,高度耐株 (MIC≥16mg/L) 37株(22.2%),头孢三嗪、壮观霉素未发现耐菌株,且抗菌活性强,头孢三嗪敏感性呈上升趋势。结论持续监测淋球菌的耐性十分重要。
在2010年天津正规男科医院就持续参加了淋球菌耐监测网,现将淋球菌对5种抗生素的耐性测定结果报告如下:
l材料和方法
I.I 材料
I.l.I菌株来源167株淋球菌均从我所2011年12月-2012年11月STD门诊患者的泌尿生殖道分泌物中分离得到,所有菌株经革兰染色、氧化酶试验和糖发酵试验证实后,传代1次洗于脱脂牛奶中于- 78℃低 温冰箱冻存备用。
1.1.2抗生素壮观霉素由美guoUpjohn公司生产,头孢三嗪为瑞士Roche公司生产,四环素、青霉素、左旋氧氟沙星标准粉由澳大利亚威尔士亲王医院Tapsall博士提供。
1.1.3 培养基 淋球菌GC基础培养基(OXOID公司生产)加入10%脱纤维新鲜羊血。
1.1.4标准菌株A、B、C、D、E5株WHO标准淋球菌菌株由中guo医学科学院皮肤病研究所提供。
2方法
2.1低抑菌浓度(MIC)测定 采用WHO西太区淋球菌耐监测规划推荐的琼脂稀释法。即先将4种抗生素 按要求配成原液,再倍比稀释成不同的浓度。将3. 7%GC基础琼脂高压灭菌,水浴冷却至50℃,加入脱 纤维新鲜羊血(终浓度10%)。取0.Iml倍比稀释好的5种抗生素工作液,加入lOml GC血液基础培养基, 混匀后倾倒平板,从低浓度至高浓度配制各种浓度的平板,实验菌株和标准菌株用18 - 24h的淋球菌菌苔,制成10rcfu/ml的菌悬液,用多头接种器将菌悬液接种于各种浓度的平板,置36℃、5%C02环境下培 养,36h后观察结果,记录无菌落生长的低抑菌浓度。以WHO A、B、C、D、E标准菌株作质控。
2.2|3一内酰胺酶测定 采用纸片碘量法测定菌株的』3一内酰胺酶,即于1试管加入lOOt/1 1万u/ml的 青霉素溶液,ioo肚l 1%淀粉溶液,50弘l碘试剂,呈蓝色混合物,在一滤纸条上滴50tLl试剂,将一接 种环培养物涂在蓝点上,放置1-2min,如蓝色变成无色即为p一内酰胺酶阳性,颜色无变化则为阴性。 每次试验以WHO E株作为阳性对照,A株作阴性对照。
3结果
3.1 p一内酰胺酶测定结果:167株淋球菌检出9株(5.4%)产青霉素酶淋球菌(PPNG)。
3.2 耐四环素淋球菌(TRNG)测定结果:167株淋球菌检出16株高水平TRNG,其MIC≥16mg/L,占9.6%。
3.3 167株淋球菌MIC测定结果见表l。青霉素MIC范围0.004-32mg/l,MIC≤0.0625mg/L的敏感株5株 (3.0%),0.125-Img/L的中敏株53株(317%)≥2mg/L耐株109株(65.3%)。其中100株为染色体介导 的耐株,占总数的91. 7% (1001109),质粒介导的耐株9株,占8.3%(9/109)。左旋氧氟沙星MIC范围 0.002- 32mg/L≤0.0625mg/L的敏感株9株(5.4%),0.125 -0.Smg/L中敏株27株(16.2%)≥1mg/L耐 株131株(78.4%)。壮观霉素MIC的范围2- 32mg/L≤32mg/L的敏感株167袜(),未发现耐菌株。头孢三嗪的MIC范围0. 002 -0.125mg/L≤0.0312mg/L敏感株153株( 91.6%),0.0625-0. Smg/L的中敏感株14株(8.4%),未发现耐株。
3.4交叉耐结果88.8%(8/9)PPNG菌株同时耐左旋氧氟沙星,其中44.4%(4/9)是左旋氧氟沙星高度耐株。87.50/6 (14/16) TRNG菌株同时耐左旋氧氟沙星,其中4株(4/16)是左旋氧氟沙星高度耐株。检出4株PPNG/TRNG,4株都同时耐左旋氧氟沙星,其中2株是左旋氧氟沙星高度耐株。55.7% (93/167)菌株对青霉素(质粒介导耐)和左旋氧氟沙星双重耐。
3.5抗生素对167株淋球菌的MICo、MIC90.青霉素分别是2mg/L、8mg/L,左旋氧氟沙星分别是4mg/L、16mg/L ,头孢三嗪分别是0.0156mg/L、0.0312mg/L,壮观霉素分别是16mg/L、16mg/L。
4讨论
淋球菌的耐性日趋严重,非洲及东南亚某些地区的PPNG阳性率达50%,在我guo,2010年报道,南京、合肥、重庆、福州PPNG的流行率分0.72%、0.417%和1.79%[2],相对较低。本研究结 果表明,PPNG检出率5.40r6 (9/167)比天津地区2011年报道的PPNG流行率3.22% (4/124)[3]有所增加,经X2检验(X2=o.43,P
本试验筛选出16株TRNG,占9.6% (16/167),与天津地区2011年报道TRNG检出率1.62% (2/124)[3]有所增加,经X2检验( X2=4.91,P
虽然目前青霉素和四环素不再作为治疗淋病的选物,但是PPNG和TRNG流行率是淋球菌耐性流行病学监测中的重要指标之一。耐青霉素的菌株常对四环素和左旋氧氟沙星有交叉耐。本文结果表明,88.8%(8/9)PPNG菌株同时耐左旋氧氟沙星,其中44. 40r6 (4/9)是左旋氧氟沙星高度耐株。87.5%(14/16)TRNG菌株同时耐左旋氧氟沙星,其中4株(4/16)是左旋氧氟沙星高度耐株。检出4株PPNG/TRNG,4株都同时耐左旋氧氟沙星,其中2株是左旋氧氟沙星高度耐株。55. 7% (93/167)的菌株对青霉素(质粒介导耐)和左旋氧氟沙星双重耐,临床应该引起重视。
随着氟喹诺酮类物的广泛使用,喹诺酮类物耐率逐年增加。据报道,菲律宾高达60%:日本为30%,许多地区分离出MIC大于16mg/L的左旋氧氟沙星高度耐株[7]。天津地区2011年次报道MIC大于 16mg/L的左旋氧氟沙星高度耐株[3]。本文结果检出22.20k (37/167) MIC大于16mg/L的左旋氧氟沙星高度耐株。耐率上升为78.4%(131/167),比同地区有所增加,亦高于guo内其它地区。
通过对5种抗生素的监测发现头孢三嗪、壮观霉素抗菌活性强。头孢三嗪敏感性呈上升趋势,未发现耐菌株,研究结果表明头孢三嗪敏感性91.6%(153/167),中敏达8.4%(14/167),MIC90亦降至0.03mg/L。叶顺章报道[8]淋球菌对头孢三嗪敏感性呈上升趋势,至1996年MIC90降至0.06mg/L,本文结果 与报道相符合。壮观霉素敏感性,未发现耐菌株。壮观霉素无论对PPNG菌株、TRNG菌株,还是左旋氧氟沙星高度耐株,都有较好疗效,临床上可以用作治疗淋病的选,但应严格掌握应用指征,给予足量正规治疗。否则,淋球菌长期处于亚剂量作用下,必然导致其逐渐产生抗性甚至依赖性。不较好治疗,导致病程改善,增加耐菌株的传播机会,耐菌株的不断出现又造成淋病的治疗困难,使发病率上升。
因此建议淋病治疗前做物敏感性试验,选择高敏感性的物,迅速抑制淋球菌的生长繁殖并根据DHI生殖感染诊疗技术充分排查,淋病原发病灶有无蔓延性感染,有无逆行感染到后尿道、前列腺及精囊腺组织。以规范化、科学化的诊疗模式提高淋病患者的一次***率,如有更多问题,可以在线咨询我院医生。
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